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液相色譜儀HPLC測定乳粉中維生素C
更新時間:2016-12-09   點擊次數(shù):1877次

維生素C是一種水溶性維生素,是人體必需營養(yǎng)素,嚴重缺乏會導致壞血病,因此它又被稱為抗壞血酸。人體無法對維生素C進行合成,只能通過食物攝取。嬰幼兒配方奶粉中的維生素對嬰幼兒的健康成長尤為重要,尤其對無法進行母乳喂養(yǎng)、將配方奶粉作為主要營養(yǎng)來源的嬰兒而言。

本文對乳粉中維生素C的液相色譜法進行研究,對樣品的提取溶液進行比較篩選,對去除蛋白、脂肪的凈化分離條件進行優(yōu)化,從而建立簡便、有效可行的分析方法,適用于日常乳粉中維生素C的檢測,同時本文對pH值影響維生素C溶液穩(wěn)定性進行深入探討。

1材料與方法

11材料與試劑

抗壞血酸標準品(純度大于99%)Sigma公司;二硫蘇糖醇(純度大于99%)Sigma公司;甲醇(色譜純) ;正己烷、磷酸二氫鉀、偏磷酸、乙酸(分析純);超純水(由Mill-Q純水器系統(tǒng)制得)。

1.2儀器與設備

液相色譜儀(配有島津LC20AD泵,SIL20AC自動進樣器,SPDM20A二 極 管 陣 列 檢 測 器、LCsolution色 譜 工 作站) ;超聲波水浴;高速冷凍離心機(德國Sigma公司) ;渦旋振蕩器(德國Heidolph公司) ;水平往復振蕩器(德國IKA公司)。

1.3標準工作液的配制

   50mg(  01mg)抗壞血酸標準品于100ml容量瓶中,以3%偏磷酸水溶液定容至刻度,配成標準貯備溶液濃度為500mg/L。置于4°C冰箱避光保存,保存期1個月。臨用前用3%偏磷酸水溶液將標準貯備溶液逐級稀釋得到的 濃 度 為0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10mg/L的標準工作溶液。

14色譜條件

色譜柱:AgilentTC-C18色譜柱,(250×4.6mm,5μm) ;流 動 相:0.05mol/L磷 酸 二 氫 鉀(pH=2.5) ;流 速:1.0ml/min;柱溫:35°C;進樣量:10μl;檢測波長:240nm。

15樣品處理

稱取1.0g試樣于50ml具塞塑料離心管中,加入1.0ml20mg/ml二硫蘇糖醇,置暗處反應半小時,取出加入3%偏磷酸水溶液溶解并定容至10ml,渦旋混勻1min,置水平往復振蕩器上振蕩或超聲波水浴中超聲提取10min,取出,加入5ml正己烷渦旋混勻30s,以不低于4000r/min離心5min,下層水相過0.45μm水相濾膜后,供液相色譜測定。

2結果與討論

21標準溶液穩(wěn)定性

維生素C的標準工作液(10mg/L)在pH<2的偏磷酸溶液和pH=2的1%乙酸溶液中6h之 內(nèi) 穩(wěn) 定,幾 乎 不 降 解,24h后測定分別降低8%和26%,;在pH=3水 溶 液 中6h降 解32%,24h后 測 定 降 解94%;pH=4和pH=6溶液中2h分別降解52%和58%,24h后測定均降解100%。

22提取溶液的選擇

本方法選擇3%偏磷酸溶液作為提取溶劑。

23色譜條件的優(yōu)化

采用AgilentTC-C18分析維生素C標準品的液相色譜圖見圖1。

 

用不含維生素C的乳粉樣品進行添加回收和精密度實驗,樣品空白和樣品添加的色譜圖見圖2~圖3,乳粉中添加維生素C的回收率和精密度實驗結果見表1。

嬰幼兒乳粉測定維生素C的測定結果如表2.

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