使用
凝膠色譜儀時(shí)會(huì)碰到的一些故障問(wèn)題
診狀可能的原因及解決方法
(一)保留時(shí)間變化
1.柱溫變化柱恒溫,必要時(shí)需配置恒溫箱
2.等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱
3.緩沖液容量不夠用》25mmol/L的緩沖液
4.柱污染每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相
6.柱快達(dá)到壽命采用保護(hù)柱
(二)保留時(shí)間縮短
1.流速增加檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載降低樣品量
3.鍵合相流失流動(dòng)相PH值保持在3"7.5檢查柱的方向
4.流動(dòng)相組成變化防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加柱恒溫
(三)保留時(shí)間延長(zhǎng)
1.流速下降管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失同前(二)3
4.流動(dòng)相組成變化同前(二)4
5.溫度降低同前(二)5
(四)出現(xiàn)肩峰或分
1.樣品體積過(guò)大用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于峰的15%
2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng)采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼,加在線(xiàn)過(guò)濾器,過(guò)濾樣品
5.進(jìn)樣器損壞更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子
(五)鬼峰
1.進(jìn)樣閥殘余峰每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物處理樣品
3.柱未平衡重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜)
4.三(TFA)氧化(肽譜)每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相)通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量,用HPLC級(jí)的水
(六)基線(xiàn)噪聲
1.氣泡(尖銳峰)流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機(jī)噪聲)清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑
3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲)采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)
5.檢測(cè)器中有氣泡流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
(七)峰拖尾
1.柱超載降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相
3.硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品
4.同前(四)4同前(四)4
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